昆曲的行当分为三大类：旦角、生角及净丑角。明初沿用「南戏」体制分生、旦、外、贴、丑、净、末，后兼收「杂剧」之长，增设小生、小旦、小外、小净、小末，明末又将贴改为老旦称为「江湖十二脚色」，也就是说一个剧团有了这十二个角色就可以闯江湖了。折子戏盛行后，人物刻划细致入微，因此将脚色细分成「二十家门」为：大冠生、小冠生、巾生、穷生、雉尾生、老旦、正旦、作旦、四旦(刺杀旦)、五旦(闺门旦)、六旦、贴旦、大面、白面、邋遢白面、老生、末、外、副、丑等，另有杂行应各种群众脚色。后来贴旦与六旦合并而把幼童部分归于作旦，所以六旦也称贴旦。原本昆曲演员必须文武兼备，后来才将武生、武旦、武净及武丑另分行当。

旦角指女性及幼童角色，昆曲的旦角行当分为：老旦、正旦、作旦、刺杀旦（又称四旦）、闺门旦（又称五旦）、贴旦（又称六旦）、武旦。

老旦是年老妇人，用本嗓近似老生，和其他旦行不相通，如《荆钗记》的王母、《精忠记》的岳母、《牡丹亭》的杜母。

正旦采用本嗓，咬字吐音比较用力，有「雌大面」之称，大都是正直刚毅的妇人如《琵琶记》的赵五娘、《窦娥冤》的窦娥、《慈悲愿》的殷氏。在正旦行当中有几个特殊的角色，违反传统，性情尖锐的妇人特别归成一类，她们在服装上有一特色，是把水袖翘起不用，故称为翘袖旦，如《烂柯山》的崔氏、《狮吼记》的柳氏、《蝴蝶梦》的田氏。

作旦是年幼的儿童，不分男女，作幼童打扮如《浣纱记》的伍子、《邯郸梦》的番儿、《白兔记》的咬脐郎。其中咬脐郎头带插有雉尾的紫金冠因此也可以雉尾生应工。

刺杀旦的著名戏码有所谓的「三刺、三杀」。刺杀他人的「三刺」是《铁冠图．刺虎》的费贞娥、《渔家乐．刺梁》的邬飞霞及《一捧雪．刺汤》的雪艳娘。被杀的「三杀」是《义侠记．杀嫂》的潘金莲、《水浒记．杀惜》的阎婆惜及《翠屏山．杀山》的潘巧云。刺杀旦并非武旦，除了刺杀时有些翻扑打斗外，演唱时必须要能准确的表现人物的个性。

闺门旦简称旦，嗓音讲究宽而甜、腔要柔，柔中仍需有抑扬顿挫，实腔与虚腔要分明，发挥抑扬最重要的就是橄榄腔。闺门旦大都扮演美貌、含蓄又富感情的深闺少女或年轻妇人，如《牡丹亭》的杜丽娘、《玉簪记》的陈妙常、《长生殿》的杨贵妃。唱腔、白口及身段都必需在细腻庄重中表达出内心的情感。

贴旦简称贴，穿坎肩彩裤，系腰巾，持团扇，不带水袖。嗓音细而脆，演唱节奏较轻快，需注意行腔运气、步法身段。贴旦大都扮演丫环或性格爽朗的少女，如《西厢记》的红娘、《牡丹亭》的春香、《钏钗记》的芸香，天真活泼但不逾矩，这和京剧中的花旦有很大的差别。

其他剧种的武旦只重开打，而昆曲的武旦唱念作打并重，要把动听繁重的唱段、高难度的作功配合在精彩的开打之中。如《扈家庄》的扈三娘、《西游记》的铁扇公主。

生角指男性角色，昆曲的生角行当分为：老生（又称正生）、外、末、冠生、小生（又可分为巾生、雉尾生、鞋皮生）、武生。

老生是年长的男性，的造形以黑三髯口为主，用本嗓，如《牧羊记》的苏武、《满床笏》的郭子仪、《渔樵记》的朱买臣。

外的年龄比老生更长，造形以白髯口为主，如《浣纱记》的伍子胥、《长生殿》的李龟年、《义妖记》的法海。

末是地位较次的老生，造形以黑满髯口为主，如《荆钗记》的李成、《一捧雪》的莫成、《牡丹亭》的陈最良、《长生殿》陈元礼。

冠生是有权位功名的男性，低音用本嗓，高音用小嗓，大小嗓的交换要不露痕迹。大冠生年龄较大，带髯口，以用嗓的方式与老生区别，如《长生殿》的唐明皇，《邯郸记》的吕洞宾、《千忠戮》的建文帝。小冠生年龄较轻，不带髯口，以用嗓的方式与小生区别，如《琵琶记》的蔡伯喈，《金雀记》的潘安、《牧羊记》的李陵。

小生用小嗓，又细分为巾生、雉尾生、鞋皮生等。巾生大都是风流潇洒的文士，如《牡丹亭》的柳梦梅、《西厢记》的张君瑞、《玉簪记》的潘必正。雉尾生头带插有雉尾的紫金冠，如《连环记》的吕布、《白兔记》的咬脐郎。鞋皮生是指穷困潦倒的书生，如《绣儒记》的郑元和、《彩楼记》的吕蒙正。

武生英武矫健，如《宝剑记》的林冲、《祝家庄》的石秀、《义侠记》的武松。

净丑角指以油彩勾出特定造型的角色，故统称花脸。昆曲的净有：文净及武净（统称大面或大花脸）、白面。丑有：付（又称二面或二花脸）、文丑及武丑（统称小面或小花脸）。

文净威武，如《莲花宝筏》的尉迟恭、《千金记》的项羽，其中有几个特殊的角色以红色为主故又称红生，如《单刀会》的关羽、《风云会》的宋太祖赵匡胤。

武净粗犷，如《蒲葵传》的钟馗、《虎囊弹》的鲁智深、《铁冠图》的李固。

白面阴狠，全脸涂白，如《连环记》的董卓、《鸣凤记》的严嵩、《长生殿》的杨国忠。

付大都是性格与外表不一的人，如《跃鲤记》中姜诗的迂腐、《水浒记》中张文远的油滑。

文丑滑稽，如《渔家乐》的万家春、《义侠记》的武大郎、《孽海记》的本无。

武丑灵活，如《西游记》的孙悟空、《雁翎甲》的时迁、《连还计》中吕布的探子。